·基本定義與化學結構

AF555 TSA是一種橙紅色熒光染料，其激發波長約為555 nm，發射波長約為565 nm。它由Alexa Fluor 555熒光染料與酪胺分子通過共價鍵偶聯而成，具有高亮度、優異的光穩定性和良好的水溶性。

·基本信息介紹（資料卡）

中文名稱：AF555 酪胺綴合物；Alexa Fluor 555 酪胺綴合物；Alexa Fluor 555 酪胺共軛物；AF555酪胺;Alexa Fluor 555 酪胺

英文名稱：AF555 TSA;AF555 Tyramide；AF555 Tyramide Conjugates；AF555 TSA Conjugates；Alexa Fluor555 Tyramide；Alexa Fluor555 TSA

激發波長Ex(nm)：555

發射波長Em(nm)：565 

儲存條件：-20℃避光避濕

純度：≥95%

儲存條件：-20℃以下冰凍、干燥保存，避免反復凍融

供應商：西安凱新生物

安全性：

操作時需佩戴防護裝備，避免接觸皮膚和眼睛。

如不慎接觸，請立即用大量清水沖洗，并尋求醫療幫助。

·核心作用原理：

利用辣根過氧化物酶（HRP）的催化作用實現信號放大。具體過程是：與目標抗原結合的一抗被HRP標記的二抗識別后，在低濃度存在下，HRP催化AF555-酪胺氧化，生成高反應性的自由基中間體。這些自由基在HRP活性位點周圍約10 nm范圍內，與鄰近蛋白的酪氨酸殘基等發生共價結合，從而將大量AF555熒光分子原位沉積在目標位置，實現信號指數級放大

·AF555 TSA 常見問題分析解釋

一、無信號或信號弱

HRP失活：檢查二抗/鏈霉親和素-HRP是否新鮮，可用DAB底物測試酶活性。

反應條件不足：TSA孵育時間需10-30分鐘，確保反應液含0.001%-0.003%新鮮H?O?。

靶點豐度低：嘗試4℃一抗過夜孵育，或適當增加一抗濃度。

二、背景過高

反應過度：縮短TSA反應時間至5-15分鐘，或使用專用終止液。

內源性過氧化物酶：封閉步驟中加入3% H?O?處理10分鐘滅活。

洗滌不充分：每步洗滌3次×5分鐘，可增加吐溫-20至0.1%-0.3%。

三、多重標記兼容性

順序標記：第一輪TSA→3% H?O?滅活HRP 15-20分鐘→第二輪TSA。

光譜選擇：推薦組合AF488（綠）、AF555（橙紅）、AF647（遠紅），確保光譜無重疊。

·相關試劑

Cyanine7 alkyne

Cyanine5.5 DBCO

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LumiTracker Lyso Green

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YO-TAP-1, green fluorescent nucleic acid stain

TO-TAP-3, far-red fluorescent nucleic acid stain

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該試劑僅用于科研實驗，不可用于人體