·基本定義與化學結構

ATTO 488 NHS Ester是一種基于羅丹明（Rhodamine）結構的綠色熒光染料，由以下三部分構成：

ATTO 488熒光核心：賦予化合物綠色熒光特性，激發波長約500 nm，發射波長約520 nm，量子產率高達0.80，熒光信號強且背景低。

NHS酯基團：作為活性反應基團，可與蛋白質、多肽等生物大分子中的游離伯氨基（-NH?）發生特異性酰胺化反應，形成穩定共價鍵。

連接鏈：短鏈結構確保熒光染料與反應基團的空間兼容性，同時維持分子整體穩定性。

·基本信息介紹（資料卡）

CAS號：863772-22-9

中文名稱：ATTO488琥珀酰亞胺酯

英文名稱：ATTO 488 NHS Ester；ATTO 488 SE；AT 488 NHS；ATTO 488 Succinimidyl Ester

分子量：686.67

分子式：C29H26N4O12S2

性狀：液體

顏色：Orange to red

純度：≥95%

儲存條件：-20℃以下冰凍、干燥保存，避免反復凍融

供應商：西安凱新生物科技有限公司

結構式：

安全性：

操作時需佩戴防護裝備，避免接觸皮膚和眼睛。

如不慎接觸，請立即用大量清水沖洗，并尋求醫療幫助。

·實用指南

實驗方案：ATTO 488 NHS 酯標記蛋白

一、蛋白樣品準備要求

濃度：建議 2–10 mg/mL（低于 2 mg/mL 會降低標記效率）。

pH 值：8.5 ± 0.5（若低于 8.0，用 1 M 碳酸氫鈉調節）。

緩沖液：不含伯胺（如 Tris、甘氨酸）或銨離子，否則干擾標記。

二、燃料儲備液配制

用無水 DMSO 溶解 ATTO 488 NHS 酯，配成 10 mM 儲備液，混勻備用。

三、染料用量與反應條件

推薦摩爾比：染料 : 蛋白 = 10:1（可根據情況調整為 5:1、15:1 或 20:1）。

將計算好的染料儲備液緩慢加入蛋白樣品中，輕搖混勻后短暫離心。

四、偶聯反應

避光，室溫孵育 60 分鐘。

每 10–15 分鐘輕緩翻轉反應管，避免劇烈振蕩。

五、偶聯產物純化（Sephadex G-25 柱）

按說明書準備好凝膠柱。

將反應液加至柱頂，待液面進入樹脂后立即加入 PBS（pH 7.2–7.4）。

繼續加 PBS 洗脫，收集有色帶的染料-蛋白偶聯物組分。

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該試劑僅用于科研實驗，不可用于人體