小鼠脂多糖結合蛋白(LBP)ELISA檢測試劑盒技術說明書

　　BS-9437 小鼠脂多糖結合蛋白(LBP)ELISA試劑盒

　　一、產品概述

　　本試劑盒采用雙抗體夾心法原理，于定量檢測小鼠血清、血漿、組織勻漿及細胞培養上清液中脂多糖結合蛋白(LBP)的濃度?。LBP作為急性期蛋白，在炎癥反應中具有雙重調控作用，其檢測對研究防御機制及病理過程具有重要意義?。

　　二、實驗原理

　　捕獲抗體包被?：抗小鼠LBP單抗體預包被于微孔板形成固相載體?。

　　抗原-抗體復合物形成?：樣本中LBP與捕獲抗體結合，加入生物素標記的檢測抗體形成"三明治"結構?。

　　顯色檢測?：TMB底物顯色后，通過450nm波長測定吸光度值，濃度與OD值呈正相關?。

　　三、試劑盒組分

　　| 組分 | 規格(96T) | 保存條件 |

　　| 預包被酶標板 | 8×12條 | 2-8℃ |

　　| 標準品 | 6濃度梯度 | -20℃ |

　　| 生物素標記抗體 | 120μL | -20℃ |

　　| 酶標復合物 | 12mL | 2-8℃ |

　　| TMB顯色液 | A/B液各6mL | 2-8℃避光 |

　　| 終止液 | 12mL | 室溫 |

　　| 濃縮洗滌液 | 60mL | 室溫 |

　　四、樣本處理

　　血清/血漿?：

　　血清：室溫靜置30min，2000×g離心15min，避免溶血?。

　　血漿：EDTA抗凝，3000×g離心20min，去除血小板。

　　組織樣本?：

　　稱取100mg組織，加入1mL PBS勻漿，反復凍融3次裂解細胞?。

　　12000×g離心10min取上清。

　　細胞上清?：

　　離心去除細胞碎片，上清液直接檢測或凍存?。

　　保存條件?：

　　短期：2-8℃(≤48h)

　　長期：-20℃(≤1月)或-80℃(≤3月)，避免反復凍融?。

　　五、操作流程

　　試劑準備?：

　　濃縮洗滌液按1:20稀釋(示例：1mL濃縮液+19mL蒸餾水)?。

　　標準品梯度稀釋：取6支EP管，依次加入標準品稀釋液200μL，倍比稀釋?。

　　加樣反應?：

　　每孔加入樣本/標準品50μL，空白孔不加。

　　37℃孵育60min，洗滌5次(每次靜置1min)。

　　檢測步驟?：

　　加入生物素標記抗體100μL，37℃孵育30min。

　　加入酶標復合物100μL，37℃避光孵育20min。

　　加入TMB底物100μL，避光顯色15min。

　　加入終止液50μL終止反應。

　　讀數?：

　　450nm波長測定OD值，參考630nm校正值?。

　　六、結果分析

　　標準曲線?：以標準品濃度對數為橫軸，OD值為縱軸繪制四參數擬合曲線?。

　　樣本計算?：根據標準曲線線性方程計算樣本濃度，乘以稀釋倍數?。

　　檢測范圍?：0.156-10ng/mL(實際以說明書為準)?。

　　靈敏度?：低檢測限≤0.078ng/mL?。

　　七、注意事項

　　樣本處理?：

　　避免使用溶血、高血脂樣本?。

　　組織樣本需去除污漬?。

　　操作規范?：

　　加樣時避免觸及孔壁，保持槍頭垂直?。

　　洗滌需凈，殘留液體會導致假陽性。

　　試劑保存?：

　　TMB顯色液需避光保存，現配現用。

　　酶標板拆封后需密封防潮?。

　　質量控制?：

　　建議設置復孔檢測，CV值應<15%?。

　　標準曲線R2值需≥0.99?。

　　八、常見問題處理

　　| 現象 | 可能原因 | 解決方案 |

　　| 陰性對照OD值偏高 | 洗滌不凈/樣本污染 | 增加洗滌次數/更換樣本? |

　　| 標準曲線線性差 | 標準品稀釋錯誤 | 重新配制標準品? |

　　| 重復性差 | 加樣不均/孵育時間不一致 | 使用多道移液器/同步計時? |

　　| 顯色過快/過慢 | 室溫波動/底物失效 | 控制環境溫度/更換底物 |

　　九、安全聲明

　　本試劑含疊氮鈉(NaN?)，避免接觸皮膚或吸入?。

　　終止液含強酸，操作時佩戴防護手套?。

　　注：以上僅供參考，不作為實際數據，實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術老師。

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